资源类型：
Pubmed体系：
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文章类型：
机构：
[1]北京化工大学生命科学与技术学院
[2]深圳市中医院
深圳市中医院
深圳医学信息中心
出处：
ISSN：
关键词：
microRNAs
cDNA文库
磁珠分离
非特异性扩增
摘要：
血浆外泌体微小核糖核酸（microRNAs,miRNAs）与癌症的发生、诊断和治疗密切相关，但其分子机制尚不明晰。本研究探讨了癌症病人血浆外泌体miRNAs在cDNA文库构建中非特异性扩增的解决方案。在酶切法中，采用核酸外切酶T （exonuclease T, EXOT）和phi29 DNA聚合酶降解引物；在磁珠法中，利用DNA结合磁珠分离模板和引物。随后，采取琼脂糖凝胶电泳和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测磁珠分离情况，运用RT-qPCR检测癌症病人血浆外泌体miRNA和不同连接物的含量变化。结果显示，非特异性扩增来源于miRNA的连接物USR5SR；核酸外切酶T （EXOT）和phi29 DNA聚合酶虽可降解USR5SR，但模板链也会发生降解；磁珠分离法中以9%PEG沉淀引物片段、15%PEG沉淀模板链效果最佳。综上所述，磁珠分离法能够高效解决cDNA文库构建中的非特异性扩增，从而实现293T细胞和癌症病人血浆外泌体miRNA cDNA文库的成功构建。
基金：
国家十三五科技重大专项（2019ZX09721001-007-002）;深圳科学技术项目（JCYJ20180507183842516）;国家重点研发计划（218YFA0903000）;国家自然科学基金（82174531,21606013）
PubmedID：
第一作者：
第一作者机构：
[1]北京化工大学生命科学与技术学院
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
王娜,何飞,郁宏伟,等.在cdna文库构建中探究癌症病人血浆外泌体mirna的特异性扩增[J].生物工程学报.2022,38(06):2213-2223.
