目的:观察黄连素应用后铜绿假单胞菌（PA）对环丙沙星的最低抑菌浓度（MIC）的变化和PA菌耐药基因GyrA突变情况。方法:收集2021年1月至10月临床分离耐环丙沙星铜绿假单胞菌25株，测定单用或联用环丙沙星和黄连素的最低抑菌浓度（MIC），计算抑菌浓度指数（FIC），筛选出联用呈协同作用菌株，并和原临床分离耐药菌配对比较。PCR扩增PA主要耐喹诺酮的GyrA基因，并对PCR扩增产物进行测序分析。结果:单用环丙沙星时，25株PA对环丙沙星的MIC均≥8 mg/L，呈耐药。单用黄连素时，MIC值为0.25~4 g/L。环丙沙星联合黄连素浓度0.125~1 g/L后，PA对环丙沙星的MIC值均有不同程度下降，下降率为100%，联用呈协同作用菌株为8株，占比32%,FIC≤0.5。联合黄连素后，黄连素应用后呈协同作用的PA菌与黄连素应用前PA菌均获得367 bp的目的片段，均有GyrA基因的表达，未发现GyrA基因突变。结论:黄连素能增加环丙沙星对PA的抗菌作用，降低临床耐药PA菌的耐药性。其耐药性降低，并未引起耐药基因GyrA基因的突变逆转。