目的:应用网络药理学联合分子对接技术探讨定志小丸干预阿尔兹海默病（Alzheimer’s disease, AD）的作用机制。方法:通过TCMSP数据库及文献检索收集与查询定志小丸的组分化学成分信息；应用PubChem和SwissTargetPrediction数据库收集药物化学成分靶点、GeneCards数据库收集AD靶点；利用DAVID数据库对共有靶点进行基因本体（GO）功能及京都基因与基因组百科全书（KEGG）通路富集分析；使用Cytoscape软件构建成分与靶点等相关网络图，以筛选主要成分与靶点进行分子对接研究。采用水迷宫实验、ELISA和Western blot法检测定志小丸干预APP/PS1小鼠的作用情况。结果:共整理得到定志小丸的52个成分及其对应的881个靶点，AD靶点9 599个，二者共同靶点101个，富集分析发现共同靶点主要参与细胞活力、缺氧应答等生物过程，及PI3K/AKT信号通路、缺氧诱导因子-1（HIF-1）信号通路、肿瘤坏死因子（TNF）信号通路等。分子对接结果显示，人参的二十碳-11,14,17-三烯酸甲酯、石菖蒲的环阿屯醇、茯苓的麦角甾烷-7,22-二烯-3β-醇及远志的3,6’-二芥子酰基蔗糖等成分能与热激蛋白90家族α类别A成员1（Heat Shock Protein 90 Alpha Family Class A Member 1,HSP90AA1）、表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR）、Janus激酶3（Janus kinase 3,JAK3）、丝裂原活化蛋白激酶8（Mitogen-Activated Protein Kinase 8,MAPK8）等靶点良好对接。试验结果发现定志小丸明显改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力，降低4-羟基壬烯酸（4-HNE）、白介素-6（IL-6）、TNF-α含量，下调磷酸化Janus激酶3（p-JAK3）和HSP90的表达，明显增加超氧化物歧化酶（SOD）活力和上调磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚单位α（PIK3CA）蛋白表达（P＜0.05）。结论:定志小丸可能是通过二十碳-11,14,17-三烯酸甲酯、环阿屯醇、麦角甾烷-7,22-二烯-3β-醇和3,6’-二芥子酰基蔗糖等关键成分作用于HSP90、JAK3、PI3KCA等靶点改善神经元活力、氧化应激和减轻炎性反应，从而干预AD。