目的 研究芍药甘草汤对子宫腺肌病（adenomyosis, AM）间质细胞的影响，并基于网络药理学探讨芍药甘草汤治疗AM的分子机制。方法 原代培养AM原代间质细胞，制备芍药甘草汤SD大鼠含药血清，采用随机数字法将其分为空白组、正常血清组、芍药甘草汤含药血清低、中、高剂量组。采用MTT法检测芍药甘草汤含药血清对AM间质细胞增殖的影响；采用划痕实验检测AM间质细胞的迁移情况；采用流式细胞术检测AM间质细胞的凋亡情况；采用网络药理学方法研究芍药甘草汤治疗AM的主要活性成分、关键靶点和通路。结果 与干预24 h后比较，干预48 h后芍药甘草汤含药血清低、中、高剂量各组AM间质细胞增殖率均降低（P＜0.05），筛选出48 h干预时间的细胞进行后续实验；与空白组、正常血清组比较，干预24 h后芍药甘草汤含药血清中、高剂量组AM间质细胞增殖率降低（P＜0.05），干预48 h后芍药甘草汤含药血清低、中、高剂量组AM间质细胞增值率降低、迁移距离缩短、凋亡率升高（P＜0.05）。与芍药甘草汤含药血清低剂量组比较，干预48 h后芍药甘草汤含药血清中、高剂量组AM间质细胞增殖率降低、迁移距离缩短、凋亡率升高（P＜0.05）；与芍药甘草汤含药血清中剂量组比较，干预48 h后芍药甘草汤含药血清高剂量组AM间质细胞增殖率降低、迁移距离缩短、凋亡率升高（P＜0.05）。网络药理学提示芍药甘草汤治疗AM的中药成分涉及98个中药成分，58个关键靶点，其中核心靶点有13个，主要作用于磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶B信号（Phosphatidylinositol 3-kinase-RAC serine/threonine-protein kinase, PI3K-Akt）通路、局部黏附、缺氧诱导因子-1信号（hypoxia-inducible factor 1, HIF-1）通路、雌激素信号通路、类固醇激素生物合成、丝裂原活化蛋白激酶信号（mitogen-activated protein kinase, MAPK）通路、卵巢类固醇合成等130条信号通路。结论 芍药甘草汤通过抑制AM间质细胞增殖、迁移，促进AM间质细胞凋亡从而发挥治疗作用，其效果呈浓度和时间依赖性；芍药甘草汤可能通过多成分、多靶点、多信号通路相互作用抑制AM的发生发展，缓解痛经，为下一步深入探讨芍药甘草汤治疗AM的起效靶点和具体调控机制提供科学依据。