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◇ 统计源期刊
文章类型：
机构：
[1]广东省中医院检验科,广州,510120
大德路总院
检验科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
Akt基因
短发卡RNA
Gateway
HepG2细胞
遗传载体
摘要：
目的 应用Gateway技术构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体,转染肝癌细胞株HepG2,验证该载体能否下调Akt基因的mRNA水平.方法 以Akt基因为靶点设计两条具有短发卡结构的shRNA序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6入门表达载体(pENTR/U6-Akt1,pENTR/U6-Akt2);转化E.coli TOP10菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR和测序鉴定;利用Gateway技术进行LR位点特异性重组,将shRNA导入目的 表达载体pLenti6/Block-it DEST Vector,再行测序鉴定(pLenti6-Akt1,pLenti6-Akt2);将重组质粒转染肝癌细胞株HepG2,提取RNA,RT-PCR检测重组质粒对mRNA水平的抑制效果.结果 经菌落PCR和DNA测序鉴定:pENTR/U6-Akts入门载体和pLenti6-Akts目的 表达载体中插入片段的序列正确,RT-PCR结果表明将shRNA分别转染HepG2细胞后,Akt的mRNA表达受到明显抑制,其中1shRNA比2#shRNA抑制效果明显.结论 利用Gateway技术成功构建了靶向人Akt基因的shRNA表达载体,为以Akt基因为靶点的肝癌基因治疗方案奠定了实验基础.
基金：
广东省自然科学基金(10151040701000031;07004832)
基金编号：
10151040701000031;07004832
第一作者：
第一作者机构：
[1]广东省中医院检验科,广州,510120
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
何敏,赵学芹,李曼,等.应用Gateway技术构建pLenti6-Akt shRNA真核表达载体[J].国际检验医学杂志.2012,33(15):1798-1800.
