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◇ 统计源期刊
文章类型：
机构：
[1]南方医科大学附属南方医院,消化研究所,广东,广州,510515
[2]广州中医药大学第二附属医院,影像科,广东,广州,510120
大德路总院
影像科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
大肠肿瘤
噬菌体抗体库
Fab抗体
癌胚抗原
摘要：
目的 构建及初步鉴定大肠癌噬菌体抗体Fab呈现库,筛选人CEA单克隆抗体,并进行序列分析.方法 分离大肠癌患者外周血淋巴细胞,提取淋巴细胞总RNA,逆转录成cDNA.用PCR扩增人全套抗体基因片段,克隆于pComb3载体,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1-Blue菌株,形成噬菌体抗体库.以固相化CEA抗原淘筛抗体库,ELISA鉴定噬菌体抗体.其中一个阳性克隆进行测序.结果 逆转录PCR分别扩增出约680bp大小的κ、λ和Fd基因.PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接转化,成功地构建了人源性Fab抗体基因库,库容量达2.1×107,Fab基因重组率为50%.以单抗捕获的CEA抗原淘洗4轮,出现特异性富集,阳性克隆经直接ELISA和交叉反应ELISA实验证实具有良好的抗CEA抗原特异性.DNA测序表明该抗体重链属IgG亚类并含有一条IgL亚类的轻链.结论 成功构建了大肠癌患者自然致敏抗体Fab段噬菌体呈现库,从中获得可与CEA抗原结合的噬菌体抗体,由此为大肠癌早期诊断及基因治疗提供了一种新的思路和方法.
第一作者：
第一作者机构：
[1]南方医科大学附属南方医院,消化研究所,广东,广州,510515
推荐引用方式(GB/T 7714)：
南清振,高蕾,张振书,等.大肠癌噬菌体抗体库的构建及抗CEA抗体的筛选[J].临床军医杂志.2008,36(1):1-6.
