目的:建立一种操作简单、稳定性好的大鼠肠肌间神经丛神经细胞的原代培养方案。方法:2~4周龄健康雄性SD大鼠，取小肠分离出纵行肌间神经丛，使用Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶消化，获取大鼠肠肌间神经丛神经细胞，使用含神经生长因子（GDNF）的Neurabasal A培养基进行培养。进行细胞形态学观察及细胞免疫荧光染色鉴定，膜片钳实验检测肠神经元细胞的静息膜电位和膜电阻。结果:原代培养的大鼠肠神经元细胞生长良好。培养5~7 d的肠神经元细胞可见长的突起，神经元和神经胶质细胞网络紧密排列；培养45 d显示细胞皱缩、神经突触断裂，呈细胞凋亡表型。取培养5 d的肠神经元细胞进行膜片钳实验，记录其静息膜电位为（-49.5±1.5）mV、膜电阻为（500±38）MΩ（ n=30）。 结论:本原代培养方案取材容易、培养方便、简单易行，细胞接种培养5~7 d可用于单细胞膜片钳实验，为深入研究神经细胞提供了可靠模型。