目的 基于Opal多重染色技术探讨非小细胞肺癌肿瘤微环境与中医寒热证、气虚证、痰湿证、阴虚证、热毒证、血瘀证的关系。方法 收集ⅢB期及以上非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer,NSCLC）初治患者的肿瘤组织样本，采用多重免疫荧光染色法检测肿瘤免疫微环境中10个指标（CD3、CD4、CD8、CD68、CD163、FOXP3、LAG3、TIM3、PD-1、PDL1）的蛋白表达情况，分析其与临床特征及中医证型的关系。结果 本研究共纳入69例患者，其中61例患者记录了中医寒热证型，56例患者记录了中医气虚证、痰湿证、阴虚证、热毒证、血瘀证证型，其中伴有气虚证、痰湿证的患者居多。分析临床特征与中医辨证分型、肿瘤免疫微环境的关系发现，Ⅳ期患者中，CD8+T细胞表达的比例最高；男性患者中痰湿证的比例比女性高，PD-L1的表达比例最高；非L858R敏感突变患者中痰湿证居多，EGFR突变中TIM3表达比例最高（P<0.05）。中医辨证分型与肿瘤免疫微环境的分析结果提示，热证患者中CD4+T细胞及CD8+T细胞表达水平更高，阴虚证与肿瘤区域中CD8+T细胞的表达负相关，痰湿证与整个区域中PD-L1的表达呈负相关（P<0.05）。结论 中医热证患者的肿瘤微环境更偏向于免疫“热肿瘤”，中医寒证向热证转化可能提高患者对免疫疗法的应答率，中医痰湿证患者的肿瘤微环境可能处于免疫抑制状态。