目的 评价一种新的贴壁细胞冻存液。方法 使用含7.5%二甲基亚砜（DMSO）（V/V%）、17.5%丙二醇（V/V%）、2.5%聚乙二醇（V/V%）、10%胎牛血清（FBS）（V/V%）的达氏修正依氏培养液（DMEM）作为新型冻存液，对MDCK、LLC-MK2、HEp-2等3种贴壁细胞进行冻存实验。实验分常规冻存组、贴壁细胞冻存对照组和贴壁细胞冻存组，通过观察细胞形态并以HEp-2细胞为典型绘制细胞生长曲线；利用细胞病变法及免疫荧光法检测复苏的贴壁细胞对甲型流感病毒、副流感3型病毒、呼吸道合胞病毒的敏感性变化。结果 3种贴壁细胞冻存组复温后细胞保持完整的单层贴壁状态，与常规冻存组细胞复苏培养3 d后的新鲜贴壁细胞形态一致；3种贴壁冻存对照组细胞复苏后其细胞大量死亡，数量急剧减少，细胞间隙增大，细胞呈破碎样。生长曲线结果显示HEp-2贴壁细胞冻存组一直保持5×10~5/mL水平。对上述病毒的敏感性检测中，贴壁细胞冻存组呈现出典型的细胞病变；感染甲型流感病毒的MDCK贴壁冻存细胞荧光呈胞浆颗粒型或细胞核均质型；感染呼吸道合胞病毒的HEp-2贴壁冻存细胞荧光呈胞浆颗粒型，合胞体中亦可见小块包涵物染荧光；感染副流感3型病毒的LLC-MK3贴壁冻存细胞荧光呈胞浆颗粒型强绿色荧光。结论 新研发的贴壁细胞冻存液可用于多种贴壁细胞的原位冻存，能保持细胞活力和对病毒的敏感性，为大批量即用型细胞产品的开发应用奠定基础。