目的 建立测定大鼠血浆中知母皂苷A-Ⅲ（TA-Ⅲ）的液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）法，并考察其药物代谢动力学（PK）特征。方法 色谱柱为Agilent XDB-C8柱（150 mm×2.1 mm,5μm），流动相为乙腈-2 mmol/L乙酸铵（55∶45,V/V），流速为250μL/min，柱温为35℃，进样量为5μL；采用电喷雾离子源，以负离子多离子反应监测方式进行检测。将12只大鼠随机分为知母单煎液组和知母-黄柏（1∶1,m/m）合煎液组，各6只，采用建立的LC-MS/MS法测定两组大鼠血浆中TA-Ⅲ的浓度（以人参皂苷Rg2为内标）。结果 TA-Ⅲ质量浓度在0.3～3 000 ng/mL范围内与TA-Ⅲ和内标峰面积比值线性关系良好，定量下限为0.3 ng/mL，精密度、准确度、提取回收率、基质效应、残留效应、稳定性试验结果均符合方法学要求。与知母单煎液组比较，知母-黄柏（1∶1,m/m）合煎液组大鼠TA-Ⅲ的血药浓度-时间曲线下面积增大，0-∞的平均滞留时间(MRT0-∞)和消除半衰期(t1/2)均显著延长（P＜0.01）。结论 该方法操作简便、结果准确可靠，可用于测定大鼠体内TA-Ⅲ的血药浓度。知母-黄柏（1∶1,m/m）合煎液促进了TA-Ⅲ的吸收，可延长其MRT0-∞和t1/2。