摘要：
目的 观察氯化钴(CoCl2)对体外培养的原代髓核细胞的影响,探寻符合研究目的体外化学干预低氧模型.方法 利用贴壁法培养原代髓核细胞,使用 100 μmol/L、200 μmol/L、300 μmol/L CoCl2 溶液分别处理 12 h、24 h、36 h、48 h,形成最终 13 个分组:空白对照组,CoCl2 处理组(100 μmol/L-12 h组,100 μmol/L-24h组,100 μmol/L-36 h 组,100 μmol/L-48 h 组;200 μmol/L-12 h 组,200 μmol/L-24 h 组,200 μmol/L-36 h组,200 μmol/L-48 h组;300 μmol/L-12 h组,300 μmol/L-24 h组,300 μmol/L-36 h组,300 μmol/L-48 h组).利用CCK-8 实验观察不同条件下细胞生长、凋亡情况,并通过免疫印迹(western blot)及实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测低氧诱导因子-1 α(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况.结果 与空白对照组比较,CoCl2 处理组的细胞生存率整体趋势随着浓度升高、时间延长而降低(P＜0.05),但在低浓度、短时间的CoCl2 诱导下,髓核细胞的生存率反而提高(P＜0.05).HIF-1α与VEGF的mRNA及蛋白表达亦随CoCl2 浓度升高和时间延长而增加(P＜0.05).但在 300 μmol/L CoCl2 的诱导下,HIF-1α、VEGF蛋白的表达进入平台期.结论 CoCl2 对原代髓核细胞的增殖、凋亡及相关基因、蛋白的表达与时间和浓度相关,总体成逐渐升高趋势.本文成功建立起一种体外培养原代髓核细胞缺氧诱导方法,可以作为研究椎间盘髓核细胞缺氧模型的参考.
