资源类型:
收录情况:
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
文章类型:
机构:
[1]广州中医药大学第二临床医学院
广东省中医院
[2]广州中医药大学岭南医学研究中心
[3]广东省中医院骨一科
大德路总院
骨科
大德路总院骨一科
广东省中医院
出处:
关键词:
牛磺熊去氧胆酸
脊髓损伤
缺糖缺氧
脊髓神经元
行为学
细胞凋亡
摘要:
背景:牛磺熊去氧胆酸是一种亲水性胆汁酸衍生物,在多种神经系统疾病模型中均有神经保护作用,但目前鲜有报道研究牛磺熊去氧胆酸对脊髓损伤的作用。目的:观察缺糖缺氧条件下牛磺熊去氧胆酸对脊髓神经元凋亡的作用,以及对脊髓损伤后小鼠运动功能恢复的影响。方法:(1)体外实验:从孕13.5 d的C57 BL/6小鼠胚胎中分离提取原代脊髓神经元,培养72 h后,分3组处理:正常组加入Neurobasal完全培养基,置于CO2培养箱(体积分数5%CO2+95%空气)内培养24h;氧糖剥夺组加入无糖的Neurobasal培养基,置于三气培养箱(体积分数94%N2+5%CO2+1%O2)培养12 h,更换为Neurobasal完全培养基后置于CO2培养箱内培养12 h;实验组处理过程大致同氧糖剥夺组,其中在加入无糖Neurobasal培养基的同时加入牛磺熊去氧胆酸。采用TUNEL染色检测细胞凋亡,CCK-8法检测细胞活性,免疫荧光染色检测细胞βⅢ微管蛋白表达。(2)动物实验:采用随机数字表法将60只C57 BL/6小鼠分为假手术组、脊髓损伤组与实验组,每组20只,脊髓损伤组与实验组采用Allen打击法建立T9-T10脊髓损伤模型,造模后第1天开始,实验组灌胃给予牛磺熊去氧胆酸溶液,假手术组与脊髓损伤组灌胃给予生理盐水,1次/d。连续给药14 d后,采用行为学和组织学方法评估脊髓组织修复情况。结果与结论:(1)体外实验:TUNEL染色、CCK-8与免疫荧光染色检测显示,氧糖剥夺组细胞凋亡数量高于正常组(P <0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达低于正常组(P <0.01);实验组细胞凋亡数量低于氧糖剥夺组(P <0.01),细胞活性与βⅢ微管蛋白表达高于氧糖剥夺组(P <0.01)。(2)动物实验:旷场实验BBB评分与后肢足迹实验显示,实验组小鼠行走与运动功能恢复程度好于脊髓损伤组。苏木精-伊红染色显示,脊髓损伤组小鼠脊髓损伤部位可见明显畸形和空洞,神经细胞数量明显减少;与脊髓损伤组比较,实验组脊髓损伤病变面积显著减小,脊髓畸形程度更小、空洞更少,神经细胞数量增加。免疫荧光染色显示,脊髓损伤组神经元胞核标记神经元细胞数量少于假手术组(P <0.01),实验组神经元胞核标记神经元细胞数量高于脊髓损伤组(P <0.01)。(3)结果表明:牛磺熊去氧胆酸能减少缺糖缺氧引起的脊髓神经元凋亡、轴突的丢失,促进脊髓损伤小鼠运动功能的恢复。
基金:
国家自然科学基金项目 (82074451),项目负责人:林定坤;广东省自然科学基金项目 (2019A1515010323),项目负责人:林定坤;广州市科技计划项目 (2023A03J0239),项目负责人:侯永辉;广州市科技计划项目 (202102020542),项目负责人:陈树东
第一作者:
第一作者机构:
[1]广州中医药大学第二临床医学院
[2]广州中医药大学岭南医学研究中心
通讯作者:
推荐引用方式(GB/T 7714):
陈泽鹏,侯永辉,陈树东,等.牛磺熊去氧胆酸干预缺糖缺氧条件下脊髓神经元的凋亡[J].中国组织工程研究.2024,28(04):528-534.