资源类型：
文章类型：
机构：
[1]广州中医药大学第二附属医院检验科,广东广州,510120
大德路总院
检验科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶
质粒
大肠埃希菌
摘要：
目的：构建重组质粒pET32a-AKT1，利用原核表达体系表达AKT1蛋白。方法逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增AKT1编码区基因，并将其与pET32a质粒融合，并转化大肠埃希菌DH5α及原核菌株BL21（DE3），采用异丙基-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导其表达，采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western-blot进行蛋白鉴定。结果目的基因与质粒完整融合；重组质粒pET32a-AKT1成功转入菌株DE3；IPTG诱导后，DE3表达相对分子质量为70000的蛋白。结论成功构建重组质粒pET32a-AKT1，且AKT1蛋白在原核表达菌DE3中完整、高效表达。
基金：
广东省科技计划项目(2010B031600126)；广东省自然科学基金课题(S2011010004750)；科技部重大新药创制专项(2012ZX09303009-003)
第一作者：
第一作者机构：
[1]广州中医药大学第二附属医院检验科,广东广州,510120
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
张战锋,韩丽乔,庄俊华,等.pET32a-AKT1重组质粒的构建与表达[J].国际检验医学杂志.2014,35(09):1092-1094.
