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文章类型：
机构：
[1]广州中医药大学第二临床医学院中心实验室,广东,广州,510006
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
RNA干扰
基因沉默
Toll样受体2
膀胱肿瘤
摘要：
目的 通过载体表达的RNA干扰技术(RNAi)阻断小鼠膀胱癌T739细胞TLR2基因的表达,建立TLR2基因稳定沉默的细胞株.方法 构建3种pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2重组质粒,脂质体法转染T739细胞,用RT-PCR法筛选干扰效果最强的重组质粒.再将该重组质粒转染T739细胞,用杀稻瘟菌素筛选抗性细胞克隆,即获得TLR2受体及其mRNA稳定表达最低的稳转细胞株,并鉴定其生物学特征.结果 测序结果显示设计合成的DNA片段已正确插入载体,将沉默效果最强的重组质粒pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2转染T739细胞,筛选出有效沉默T739细胞TLR2基因表达的细胞株T739-TLR2△.TLR2 mRNA和受体表达分别下降95%和90%以上;T739-TLR2△细胞增殖指数降低、群体倍增时间延长,未发现明显凋亡细胞.结论 构建pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR-TLR2重组质粒能稳定抑制T739细胞TLR2表达,可用于研究TLR2基因在T739细胞的功能与作用.
基金：
国家自然科学基金(30873426);教育部高等学校博士点科研基金(200805720010);广东省中医药科研课题(2009191)
PubmedID：
第一作者：
第一作者机构：
[1]广州中医药大学第二临床医学院中心实验室,广东,广州,510006
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
危建安,曾星,韩凌,等.TLR2基因稳定沉默膀胱癌细胞株T739-TLR2△建立及生物学特征鉴定[J].南方医科大学学报.2010,30(08):1797-1800.
