资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]广州中医药大学第二附属医院//广东省中医院骨科,广东,广州,510120
大德路总院
骨科
广东省中医院
[2]佛山市南海区人民医院骨科,广东,佛山,528200
[3]中山大学附属第二医院骨科,广东,广州,510120
中山大学附属第二医院
出处：
ISSN：
关键词：
LIM-1矿化蛋白
间充质干细胞
成骨活性
基因转染
摘要：
[目的]快速构建大鼠LIM矿化蛋白-1基因重组腺病毒载体,转染MSC,探讨LMP-1基因对MSC成骨分化和成骨活性的影响.[方法]从大鼠成骨细胞内提取总RNA,并设计LMP-1特异性引物进行RT-PCR,获取LMP-1基因后利用Invitrogen公司的TOPO定向克隆技术创建入门克隆pENTR/D-LMP-1.转化TOP10细菌后,挑取阳性克隆摇菌提取质粒,入门克隆再与表达载体pAD/CMV/V5-DEST进行同源重组反应得到病毒载体pAD/CMV/V5-LMP-1.转化细菌后挑选阳性克隆摇菌提取重组病毒质粒,用PacI内切酶线性化后用转染293A细胞后得到重组腺病毒载体.以腺病毒为载体,将大鼠LMP-1基因体外转染于3代大鼠MSC细胞内,检测LMP-1基因在MSC细胞的表达,分别观察转染后实验组与对照组Ⅰ型胶原、碱性磷酸酶、骨钙素表达变化以及骨钙结节的形成情况,评价LMP-1基因的成骨能力.[结果]成功获取大鼠LMP-1基因,入门质粒与病毒表达质粒经过酶切鉴定以及测序验证.LMP-1基闪能在MSC中高效表达.转然后MSC的Ⅰ型胶原,碱性磷酸酶、骨钙素的表达明显增强,骨钙结节形成增多.[结论]利用Gateway技术构建LMP-1重组腺病毒载体相对简单,可快捷获得的pAd-LMP-1.pAd-LMP-1转染MSC后,LMP-1基因能促进MSC向成骨细胞分化,增强其成骨作用.
基金：
广东省自然科学基金(5001761)%教育部留学回国人员科研启动基金
基金编号：
5001761
第一作者：
第一作者机构：
[1]广州中医药大学第二附属医院//广东省中医院骨科,广东,广州,510120
推荐引用方式(GB/T 7714)：
程志安,刘冬斌,吴燕峰,等.重组腺病毒载体Ad-LMP-1的构建及其转染MSC后成骨活性[J].中山大学学报(医学科学版).2010,31(02):199-206.
