[目的]分离、纯化新生小鼠真皮间充质干细胞(mdMSCs),在体外培养、鉴定并标记,为MSCs的细胞学治疗开拓实用、简便的纯化方法.[方法]采用低血清培养基,消化-贴壁-传代法体外培养mdMSCs,并对第3代mdMSCs从形态学、细胞生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期和表面标记、细胞纯度等方面进行鉴定.CM-DiI红色荧光蛋白标记所获取的mdMSCs.[结果]培养的第3代mdMSCs细胞形态比较均一,主要为多角形、扯布状;生长曲线显示前5 d mdMSCs细胞数呈指数递增,倍增时间约为22 h,第7天后进入生长平台期;流式细胞仪检测大部分mdMSCs处于静止期(G0/G1期:87.25%);第3代mdMSCs CD44+,CD29+双阳性细胞为92%;CM-DiI标记mdMSCs的细胞密度、大小与光镜下所见基本一致.[结论]组织消化-细胞贴壁-传代培养法能有效培养小鼠真皮MSCs,培养体系简便、稳定.红色荧光蛋白CM-DiI对mdMSCs细胞能进行有效的标记.