资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]广州市第一人民医院麻醉科及麻醉学实验室,广东广州510180
[2]广州市第一人民医院门诊部,广东广州510180
[3]广州中医药大学第二附属医院麻醉科,广东广州510120
大德路总院
麻醉科
大德路总院麻醉科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
机械牵张
高迁移率族蛋白1
基因
报告
摘要：
目的:构建高迁移率族蛋白B1(HMGB1)启动子驱动的荧光素酶报告基因的真核表达载体pGL3-HMGB1 P,转染肺泡上皮细胞(A549)后检测报告基因在机械牵张刺激中的转录活性.方法:以A549细胞基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增HMGB1启动子片段,测序正确后克隆入荧光素酶报告基凶表达载体pGL3,将重组质粒pGL3-HMGB1 P导入A549细胞,检测不同强度机械牵张(分别为5%和20%)刺激下荧光素酶的活性变化.结果:PCR和测序结果表明扩增的HMGB1启动子序列正确,酶切榆测证实重组真核表达载体pGL3-HMGB1P构建成功.在5%牵张应变作用下,转染pGL3-HMGB1P的A549细胞荧光素酶活性是转染空载体pGL3-Basic的2.9倍(P<0.05);而在20%牵张应变作用下,转染pGL3-HMGB1 P的A549细胞荧光素酶活性是转染空载体pGL3-Basic的6.2倍(P<0.01).结论:利用荧光素酶报告基因系统证实机械牵张可诱导HMGB1转录表达增加,为深入研究HMGB1转录表达的调控机制提供了基础.
基金：
广州市医药卫生科技项目(2008-yB-012);重点项目(2008-zDi-14);广东省科技汁划项日(2007831509007)
第一作者：
第一作者机构：
[1]广州市第一人民医院麻醉科及麻醉学实验室,广东广州510180
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
丁宁,肖慧,高巨,等.HMGB1启动子荧光素酶报告基因的构建及鉴定[J].第四军医大学学报.2009,30(22):2580-2582.
