摘要：
目的:观察电针血清调控磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)通路对肌卫星细胞自噬的影响.方法:原代培养多裂肌卫星细胞,选择传至第3代的肌卫星细胞,按本课题组前期的实验方法获取电针血清,先以空白血清(无血清,仅含培养基)干预细胞12h诱导肌卫星细胞自噬,后将各组细胞随机分为空白血清组、10％电针血清组、10％电针血清+LY294002组、3-MA组,各组分别干预12、24h后,采用CCK-8检测各组细胞的增殖能力,Western blot检测各组细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、Beclin1、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Pax7蛋白的表达变化.结果:CCK-8结果显示,培养12h时,10％电针血清组细胞增殖能力优于其余3组(P＜0.05),培养24h时,10％电针血清组细胞增殖能力优于其余3组及12h时电针血清组(P＜0.01,P＜0.05),10％电针血清+LY294002组和3-MA组优于空白血清组(P＜0.01).Western blot结果显示:12h后,与空白血清组、10％电针血清+LY294002组比较,10％电针血清组和3-MA组p-Akt、Pax7蛋白表达显著升高(P＜0.01,P＜0.05),Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P＜0.01,P＜0.05).24h后,与空白血清组、10％电针血清+LY294002组比较,10％电针血清组和3-MA组p-Akt蛋白表达显著升高(P＜0.01),Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白表达显著降低(P＜0.01),10％电针血清组Pax7蛋白表达显著升高(P＜0.01);3-MA组Pax7蛋白表达显著高于空白血清组(P＜0.01).与12h时本组比较,空白血清组Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达均显著升高(P＜0.01),Pax7蛋白表达显著降低(P＜0.01),10％电针血清组Pax7蛋白表达显著升高(P＜0.05).结论:电针血清可改善肌卫星细胞的过度自噬,保护肌卫星细胞的增殖,该作用可能与激活PI3K/Akt通路有关.
