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凝胶电泳微流控芯片提取外泌体及对人血浆外泌体中miRNA-21 的测定

[Extraction of exosome by gel electrophoresis microfluidic chip and determination of miRNA-21 in exosome of human plasma].

文献详情

资源类型:
Pubmed体系:

收录情况: ◇ 统计源期刊 ◇ 北大核心 ◇ CSCD-C ◇ 卓越:梯队期刊

机构: [1]湖北医药学院附属东风医院 医学实验中心,湖北 十堰 442008 [2]湖北医药学院 药学院,湖北 十堰 442000 [3]深圳市宝安纯中医治疗医院 药学部,广东 深圳 518102 [4]武汉工程大学 化学与环境工程学院,湖北 武汉 430205
出处:
ISSN:

关键词: 外泌体 微流控芯片 癌症 纳米多孔薄膜 凝胶电泳

摘要:
为了开发一种用于人体血浆中外泌体的高效快速提取和分离的新型微流控芯片,文中收集健康人体外周 血液样本,自主设计并制备基于纳米多孔薄膜和琼脂糖凝胶电泳的微流芯片。提取的外泌体使用透射电镜、 Nanosight 和 Western blotting 等技术进行表征,鉴定并分析其形态、浓度和粒径分布。同时将超速离心法和微流 芯片所提取的外泌体进行粒径和浓度的分析比较,探讨两种方法各自的提取效率。最后,利用 RT-PCR 技术分析 外泌体中 miRNA-21 的相对表达量。 凝胶电泳微流芯片可在 1 h 内快速的从血浆中高效率地提取出纯度高、大 小完整、尺寸分布在 30–200 nm 之间的外泌体,满足后续下游分析的要求。通过与现有最普遍的超速离心法进行 对比分析,当血浆样本量小于 100 μL 时,凝胶电泳微流芯片提取外泌体的效率为超速离心法的 3.80 倍。凝胶电 泳微流芯片提取外泌体的优化参数是:电场电压:100 V;琼脂糖凝胶浓度:1.0%;注射泵流速:0.1 mL/h。凝 胶电泳微流芯片可快速高效地提取出外泌体,对外泌体与癌症生物标记物的相关研究具有潜在的巨大优势,也为 基于外泌体的即时诊断技术提供了可能。

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第一作者:
第一作者机构: [1]湖北医药学院附属东风医院 医学实验中心,湖北 十堰 442008 [2]湖北医药学院 药学院,湖北 十堰 442000
通讯作者:
通讯机构: [1]湖北医药学院附属东风医院 医学实验中心,湖北 十堰 442008 [3]深圳市宝安纯中医治疗医院 药学部,广东 深圳 518102
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