摘要：
目的 利用基因定点突变技术构建RHD变异型克隆,克服RHD变异型克隆难以获得的问题.方法 提取总RNA并反转录后,扩增获得RHD和RHCE混合cDNA,从克隆质粒中筛选RHD;根据弱D12、弱D25和弱D33的特异性突变位点设计引物,分别进行PCR扩增反应,诱导目的基因突变,DpnI酶处理PCR产物,转化后测序验证.结果 克隆测序的结果显示,质粒中分别存在830A、341A和520A的突变,证实已经通过基因定点突变技术成功获得了弱D12、弱D25和弱D33的克隆.结论 通过基因定点突变可以改造野生型RHD-cDNA,获得变异型的RHD-cDNA,为血型研究打开新的路径.
