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机构：
[1]南方医科大学南方医院中医科,广东省,广州市,510515
[2]广州中医药大学第二附属医院广东省中医院内科,广东省,广州市,510515
大德路总院
内科
广东省中医院
[3]南方医科大学南方医院内分泌科,广东省,广州市,510515
出处：
ISSN：
关键词：
糖尿病
非胰岛素依赖型
肾阴虚
杂交
基因文库
摘要：
目的:运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证DNA消减文库,为制定2型糖尿病的一、二级康复预防提供理论参考.方法:选择2004-08南方医科大学南方医院内分泌科就诊的汉族2型糖尿病患者1例,符合中医肾虚证诊断标准中关于典型肾阴虚证的诊断,肝肾功能正常,无急慢性感染.以同时期、同性别、年龄相当的自愿者1名作为正常人对照.参照Maxim方法采用硅胶法抽提2例观察对象血白细胞DNA,用RsaI酶切基因组DNA成大小不等的片段,分别与两种不同的接头连接,进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应,将聚合酶链反应产物与U/A载体连接,经蓝白斑筛选及菌液聚合酶链反应筛选出阳性重组质粒,构建糖尿病肾阴虚证DNA消减文库.测定抽提基因组DNA的纯度及含量;基因组DNA RsaI酶切产物;消减杂交产物扩增结果;蓝白斑筛选阳性克隆;聚合酶链反应方法筛选重组质粒.结果:用抑制性消减杂交技术筛选出了糖尿病肾阴虚证的差异DNA片段,基因组DNA经过RasI酶切消化后,所得DNA片段主要集中在200～2 000 bp;消减杂交产物经两次聚合酶链反应扩增后,产物明显增多,内含数条隐约可见的条带,主要集中在0.2～1.5 kb;蓝白斑α互补筛选出含有外源插入片段的阳性克隆,结果正向消减杂交产物得到286个克隆,反向消减杂交产物得到262个克隆;随机挑取92个阳性克隆,经聚合酶链反应分析证实86个克隆的质粒内均载有差异性DNA片段,大小为200～1 000 bp,从而成功构建了糖尿病肾阴虚证特异的DNA消减文库.结论:抑制性消减杂交技术能够快速有效地分离差异DNA片段以构建糖尿病肾阴虚证DNA消减文库,为进一步筛选和克隆糖尿病肾阴虚证相关基因奠定了基础.
基金：
国家自然科学基金(30271573)%广东省科技厅科技计划(2003B31712)%国家中医药管理局科研项目(02-03JP43)
第一作者：
第一作者机构：
[1]南方医科大学南方医院中医科,广东省,广州市,510515
通讯作者：
通讯机构：
[1]南方医科大学南方医院中医科,广东省,广州市,510515
[*1]南方医科大学南方医院中医科,广东省 广州市
推荐引用方式(GB/T 7714)：
崔丽娟,赵晓山,罗仁,等.运用抑制性消减杂交技术构建2型糖尿病肾阴虚证的相关基因文库[J].中国临床康复.2005,9(19):94-96.
