目的 探讨 TGF-β1 诱导的黄韧带细胞增生效应及其对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor，CTGF）表达的影响。方法 取腰椎椎间盘突出髓核摘除术中的黄韧带组织，采用胶原酶预消化组织块培 养法分离培养黄韧带细胞。采用形态学观察、免疫荧光染色观察、MTT 法检测细胞增殖情况进行细胞鉴定。取 第 3 代黄韧带细胞分为 5 组，A、B、C、D 组分别于细胞中加入 3 ng/mL TGF-β1、50 ng/mL CTGF、3 ng/mL TGF- β1+CTGF 中和抗体（1∶500）封闭、50 ng/mL CTGF+CTGF 中和抗体（1∶500）封闭，E 组加入无血清 DMEM 作为 对照。采用 MTT 法检测 TGF-β1 和 CTGF 对黄韧带细胞增殖的影响，Western blot 检测 CTGF 蛋白表达，实时荧 光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、CTGF 基因表达。 结果 培养的黄韧带细胞形态呈多样性，均表现出典型的黄韧带成纤维细胞表型；所有细胞均表达Ⅰ型胶原蛋 白及波形蛋白，部分细胞表达Ⅲ型胶原蛋白；MTT 鉴定示随培养时间延长，各代细胞吸光度（A）值均逐渐增加， 同代细胞各时间点间 A 值比较差异均有统计学意义（P<0.05），相同时间点各代细胞间 A 值比较差异均无统计学 意义（P>0.05）。培养 24 h MTT 法检测示 A、B 组细胞 A 值显著高于 E 组（P<0.05）；而加入 CTGF 中和抗体后， C、D 组 A 值降低，但仍高于 E 组（P<0.05）；A、C 组间及 B、D 组间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。Western blot 检测示 A、B 组 CTGF 蛋白相对表达量明显高于 E 组（P<0.05）；而加入 CTGF 中和抗体后，C、D 组 CTGF 蛋 白相对表达量显著降低，但仍高于 E 组（P<0.05）；A、C 组间及 B、D 组间比较差异亦有统计学意义（P<0.05）。 qRT-PCR 检测示，与 E 组比较，A 组 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量均显著增高（P<0.05）；加入 CTGF 中和抗体后，C 组各基因表达受到抑制，mRNA 相对表达量显著低于 A 组，但仍显著高于 E 组（P<0.05）。 B 组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量显著高于 E 组（P<0.05），但 CTGF mRNA 相对表达量与 E 组比较差 异无统计学意义（P>0.05）；加入 CTGF 中和抗体后，D 组Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原 mRNA 相对表达量受到抑制，低 于 B 组，但仍显著高于 E 组（P<0.05），CTGF mRNA 相对表达量与 B、E 组比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 TGF-β1 可促进黄韧带细胞的 CTGF、Ⅰ型胶原和Ⅲ型胶原基因及蛋白表达水平增加，TGF-β1 通过 CTGF 协 同促进黄韧带细胞增生。