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氮磷比对脂多糖胺/质粒复合物性能的影响

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机构: [1]广州中医药大学第二附属医院广东省中医院口腔科 广东 广州 510120 [2]中山大学光华口腔医学院中山大学附属口腔医院修复科中山大学口腔医学研究所 广东 广州 510055
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关键词: 脂质体转染 骨形态生成蛋白2 脂质体 胆固醇 海藻酸钠

摘要:
目的 采用新型阳离子共聚物脂多糖胺(lipopolysaccharide-amine, LPSA)与质粒构建脂多糖胺/质粒复合物(LPSA/pDNA),探究其理化性能随氮磷比(N/P)变化规律。方法 构建含骨形态生成蛋白2(bone morphogenetic protein 2, BMP2)的非融合的真核表达质粒并鉴定。配置不同N/P的LPSA/pDNA复合物,凝胶阻滞实验探究LPSA与pDNA结合能力;动态光散射仪检测其粒径及zeta电位;透射电镜及原子力显微镜下观察LPSA/pDNA复合物形态;探究LPSA/pDNA复合物耐酶解能力随时间的变化规律。结果 经琼脂糖凝胶电泳及测序鉴定,真核表达载体BMP2编码序列片段与Genebank一致。随着N/P增加,LPSA/pDNA阻滞质粒DNA能力增加;当N/P>10时,LPSA可基本阻滞pDNA。LPSA/pDNA复合物的粒径随着N/P的增加先减小后增大,当N/P>3时,LPSA/pDNA粒径<150 nm;当N/P为12~25时,LPSA/pDNA粒径稳定于65 nm左右,LPSA/pDNA表面zeta电位呈正电性,电荷值为9~35 mV。当N/P为60时,随着DNaseⅠ处理时间增加,4 h内琼脂糖凝胶电泳条带亮度无明显变化,6 h时琼脂糖凝胶电泳条带亮度稍微减弱。结论 N/P为12~25时,LPSA与pDNA形成直径约65 nm的阳离子复合物纳米囊泡。N/P为60时,LPSA可有效结合pDNA,LPSA/pDNA在4 h内,耐DNaseⅠ酶解。

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第一作者:
第一作者机构: [1]广州中医药大学第二附属医院广东省中医院口腔科 广东 广州 510120
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