资源类型：
Pubmed体系：
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◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]广东省中医院检验科,广东广州,510120
大德路总院
检验科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
蛋白激酶B
shRNA
表达载体
结肠癌细胞
摘要：
目的 构建靶向人Akt基因的shRNA真核表达载体,通过RNAi下调Akt基因在结肠癌Lovo细胞系中的表达,观察对结肠癌细胞生长的影响.方法 将靶向人Akt基因的两条shRNA(Akt1-U6-1#;Aktl-U6-2#)表达序列克隆到入门载体pENTRTM/U6的黏性末端,测序鉴定后与目的表达载体Plentio/Block-iT DEST Vector进行LR位点特异性重组；分别将入门载体与目的表达载体转染入Lovo细胞,对细胞株行RT-PCR和Western blotting检测,观察siRNA对靶基因Akt的抑制效果.结果 DNA测序证实pENTRTM/U6-TF-shRNA入门载体和Plentio/Block-iT DEST目的表达载体为阳性克隆,转染Lovo细胞后,Akt基因在mRNA和蛋白水平的表达量受到明显抑制.结论 成功构建了靶向人Akt的shRNA表达载体,且该载体在体外能有效抑制Lovo细胞Akt基因表达,为进一步研究Akt的功能和肿瘤的基因治疗奠定了实验基础.
基金：
广东省自然科学基金(10151040701000031；;S2011010004750)；
基金编号：
10151040701000031；;S2011010004750
PubmedID：
第一作者：
第一作者机构：
[1]广东省中医院检验科,广东广州,510120
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
黄宪章,赵学芹,李曼,等.Akt shRNA载体的构建及其对结肠癌细胞株Lovo Akt基因表达的抑制作用[J].南方医科大学学报.2011,31(11):1914-1917.
