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◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]广州市第一人民医院,麻醉科·麻醉学实验室,广东,广州,510180
[2]广州市第一人民医院,门诊部,广东,广州,510180
[3]广州中医药大学第二附属医院麻醉科,广东,广州,510120
大德路总院
麻醉科
大德路总院麻醉科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
糖基化终产物
受体
噬菌体展示
肽库
蛋白质相互作用
摘要：
目的 构建晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end-product, RAGE)胞外段基因的原核表达载体并诱导表达,应用噬菌体展示技术筛选其相互作用蛋白.方法 用RT-PCR方法扩增人RAGE胞外段cDNA,构建于原核表达载体pET14b,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导RAGE胞外段融合蛋白表达,用Ni2+-NTA亲和层析柱进行纯化并行Western blot鉴定.以重组RAGE胞外段蛋白为靶分子,进行3轮噬菌体展示环七肽库的筛选,从第3轮洗脱物中随机挑选分隔良好的噬菌体克隆扩增后进行ELISA鉴定.对获得的阳性噬菌体克隆分别进行扩增、纯化,提取DNA测序后翻译为氨基酸序列,用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列.结果 成功构建并表达、纯化了RAGE胞外段融合蛋白.经过3轮筛选后,随机挑取的24个噬菌体克隆中11个可与RAGE胞外段结合.对11个噬菌体测序后用BLAST软件搜索同源序列,得到14个编码蛋白.结果 应用噬菌体展示技术筛选到与RAGE胞外段相互作用的蛋白,为进一步研究其功能和作用机制提供新线索.
基金：
广州市医药卫生科技资助项目(2008-YB-012)%重点项目(2008-ZDi-14)%广东省科技计划项目(2007B31509007)
第一作者：
第一作者机构：
[1]广州市第一人民医院,麻醉科·麻醉学实验室,广东,广州,510180
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
丁宁,肖慧,高巨,等.晚期糖基化终产物受体胞外段的原核表达及其相互作用蛋白的筛选[J].中国药理学通报.2009,25(04):492-496.
