资源类型：
收录情况：
◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
文章类型：
机构：
[1]广东省中医院检验科,广州市,510120
大德路总院
检验科
广东省中医院
[2]广州医学院检验系,510120
[3]中山大学附属第三医院检验科,广州市,510630
中山大学附属第三医院
出处：
ISSN：
关键词：
细胞周期蛋白依赖激酶2
重组质粒
毕赤酵母
摘要：
目的:构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的胞外分泌型pPICZαA-CDK2重组质粒,利用毕赤酵母表达体系表达CDK2蛋白.方法:从人白细胞中提取总RNA,逆转录后采用聚合酶链反应扩增出CDK2基因,并将其插入pPICZαA质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌JM109进行克隆.重组质粒pPICZαA-CDK2转化毕赤酵母菌株GS115,甲醇诱导酵母细胞进行蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况及抗原性.结果:PCR电泳及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到表达载体中;重组质粒转入酵母菌GS115,酵母经甲醇诱导表达后经SDS-PAGE检测发现在34 000左右有条带,Western-Blot检测发现有与CDK2单抗结合蛋白.结论:成功构建重组质粒,初步判断CDK2全长蛋白在毕赤酵母中表达成功且抗原性良好.
基金：
广东省自然科学基金(10151040701000031%07004832)%广东省科技计划项目(20108060900069)
基金编号：
10151040701000031%07004832
第一作者：
第一作者机构：
[1]广东省中医院检验科,广州市,510120
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
黄宪章,张战锋,谢诗园,等.pPICZαA-CDK2重组质粒的构建及表达[J].实用医学杂志.2011,27(16):2917-2919.
