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◇ CSCD-C
文章类型：
机构：
[1]广州中医药大学DME中心,广东,广州,510405
[2]广州中医药大学第二临床医学院,广东,广州,510120
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
白介素1受体Ⅰ型
重组质粒
毕赤酵母
摘要：
目的 构建白介素1受体Ⅰ型细胞外基因(可溶性白介素1受体Ⅰ型,sIL-1R Ⅰ)的pPICZαA-sIL-1R Ⅰ重组表达载体,利用毕赤酵母表达技术表达sIL-IR Ⅰ蛋向.方法 采用RT-PCR技术扩增基因sIL-1R Ⅰ.经酶切连接构建重组质粒pPICZαA-sIL-IR Ⅰ,转化E.coli Stb13;阳性克隆经测序成功后,把pPICZαA-sIL-IR Ⅰ重组质粒电转入毕赤酵母菌株GS115,PCR对阳性克隆进行鉴定,以及对GS115转化子表型筛选.确定表型后,对重组菌株进行甲醇诱导蛋白表达.提取菌体蛋白和上清液进行Western blotting检测以鉴定蛋白表达属于菌内表达还是分泌表达.结果 pPICZαA-sIL-IR Ⅰ重组质粒构建成功;pPICZαA-sIL-IR Ⅰ成功电转入酵母菌GS115:转化子表型筛选结果为甲醇诱导缓慢型Muts:对培养上清和菌体蛋白进行Western blotting检测结果:上清没有检测到蛋白,在菌体内检测到蛋白.结论 成功运用毕赤酵母表达体系表达sIL-1R Ⅰ蛋白,为sIL-IR Ⅰ的研究和应用提供实验基础.
第一作者：
第一作者机构：
[1]广州中医药大学DME中心,广东,广州,510405
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
吕渭辉,庄俊华,陈炜烨,等.重组人白介素1受体Ⅰ型细胞外基因在毕赤酵母的表达[J].南方医科大学学报.2010,30(08):1841-1843.
