摘要：
目的 构建含有编码白细胞介素1 Ⅰ型受体(IL-1R I)胞外区蛋白基因的PET32a-IL-1RⅠ重组质粒,利用原核表达体系表达 IL-1RⅠ的胞外区蛋白.方法 从人白细胞中提取总RNA,采用聚合酶链反应(PCR)从总RNA中扩增出IL-1RⅠ胞外段基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆.将克隆得到的PET32a-IL-1RⅠ重组质粒转化入表达菌株BL21(DE3),通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western-Blot鉴定蛋白表达效果.结果 菌落PCR及DNA测序证实IL-1RⅠ胞外段基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出相对分子质量为67×103左右的蛋白.结论 成功地克隆了人IL-1RⅠ胞外段基因并在大肠杆菌中进行了表达,为IL-1RⅠ的进一步研究打下了基础.
