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◇ 统计源期刊
◇ 北大核心
◇ CSCD-E
文章类型：
机构：
[1]广东省中医院检验科,广州,510120
大德路总院
检验科
广东省中医院
出处：
ISSN：
关键词：
CDK2
重组质粒
原核表达
摘要：
目的 构建含有细胞周期依赖性激酶2(CDK2)的PET32a-CDK2重组质粒,利用原核表达体系表达CDK2蛋白.方法 从人白细胞中提取总RNA, 采用聚合酶链反应从总RNA中扩增出CDK2基因,并将其插入PET32a质粒,构建重组质粒,化学法转化大肠杆菌DH5α进行克隆.将克隆得到的PET32a-CDK2重组质粒转化入表达菌株BL21,通过异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其蛋白表达,SDS-PAGE和Western-Blot鉴定蛋白表达情况.结果 菌落PCR及DNA测序证实CDK2基因已正确克隆到载体中;重组质粒成功转入表达菌株BL21(DE3),SDS-PAGE和Western-Blot结果显示表达菌经IPTG诱导后表达出52 kD左右的蛋白.结论 成功构建重组质粒,并且CDK2全长蛋白在原核表达菌BL21中成功表达.
基金：
广东省自然科学基金资助项目(10151040701000031;07004832)%广东省科技计划项目(2010B060900069)
基金编号：
10151040701000031;07004832
第一作者：
第一作者机构：
[1]广东省中医院检验科,广州,510120
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
黄宪章,张战锋,陈炜烨,等.PET32a-CDK2重组质粒的构建与表达[J].广东医学.2011,32(06):681-684.
