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机构：
[1]广东省中医院检验科,广东 广州,510006
大德路总院
检验科
广东省中医院
[2]佛山市第二人民医院检验科,广州 佛山,528000
出处：
ISSN：
关键词：
白血病干细胞
人CD44基因
原核表达
基因重组技术
摘要：
目的：检测血液肿瘤细胞株K562、HL-60及临床急慢性粒细胞白血病患者外周血细胞CD44分子表达、分型情况，通过基因重组技术原核表达CD44分子。方法根据CD44 mRNA剪切模式设计引物，PCR扩增CD44基因，测序比对分析分子亚型，然后酶切插入原核表达载体pET32a(+)，转化大肠杆菌BL21(DE3)，IPTG诱导表达后进行Western blot分析。结果9例临床标本均为CD44isoform4型，K562细胞株中未能检测到CD44，HL-60细胞株CD44为isoform4变异型；在37℃1 mM的IPTG诱导2h后，CD44基因胞外区片段(hCD44om)的蛋白表达量最大，约占菌体总蛋白的48.6%，Western blot检测显示为特异性的CD44蛋白。结论 AML和CML外周血标本分子为CD44isoform4型，HL-60细胞株为CD44isoform4变异型，可能为mRNA新的剪切体及基因组不稳定突变所致；在大肠埃希菌中成功表达CD44isoform4型蛋白胞外区多肽，为后续单克隆抗体研制奠定了基础。
基金：
广东省医学科研基金资助项目(编号A2012220)
基金编号：
编号A2012220
第一作者：
第一作者机构：
[1]广东省中医院检验科,广东 广州,510006
共同第一作者：
通讯作者：
推荐引用方式(GB/T 7714)：
蔡壬辛,洪旭灿,张轩,等.血液肿瘤CD44基因检测及4亚型克隆原核表达[J].实验与检验医学.2015,33(01):7-10+27.
