[目的]为基于大孔树脂吸附结合环氧交联剂交联法固定脂肪酶等工业用酶奠定基础.[方法]使用大孔树脂吸附,而后环氧交联剂交联的方法进行脂肪酶的固定化,研究各因素对吸附-交联固定化的影响,并采用响应面法对固定化条件进行优化,制备固定化酶并考察其稳定性.[结果]筛选出大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂.最佳固定化条件为:吸附温度45℃,给酶量60 mg·g-1,交联温度30℃,交联时间12.5 h,pH6.36,交联剂体积分数为0.7％.由上述条件制备所得的固定化酶活力为565.31 U·g-1,酶活力回收率为32.16％.与游离酶相比,固定化酶的热稳定性和酸碱稳定性均有明显提升;连续操作10次,固定化酶活力仍保留34.86％,操作稳定性较好;4℃ 条件下储存30 d,固定化酶活力仍保留64.81％.[结论]大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂制备的固定化脂肪酶热稳定性、酸碱稳定性均得到显著提升,且具有良好的操作及储存稳定性.